南宫28提供的人类转移性黑色素瘤A2058细胞的培养和维护指导如下：

培养条件

气相组成：95%空气 + 5%二氧化碳；培养温度设定为37℃。培养基为DMEM，包含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素（P/S）。初次传代建议采用1:2的比例，传代间隔为2天。为了保证细胞的良好状态，建议与细胞一起购买完整培养基，以享受更优惠的价格。

细胞处理注意事项

收货后，请勿立即打开瓶盖，务必核对培养瓶上标记的细胞名称与您的订单是否一致，并检查培养瓶是否有破损或漏液等异常情况。如无异常，使用显微镜观察细胞生长情况并拍照保存（480x、100x、200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据，未提供照片则默认为状态良好。

贴壁细胞传代步骤

1. 弃去培养液，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%的胰蛋白酶消化液约1-2ml到培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶，添加超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（分入两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，然后放入37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。

悬浮细胞传代步骤

1. 采用半换液法：竖立培养瓶，静置1小时，轻吸掉约3ml培养基，补给相同体积的完全培养基。如果培养基颜色变化慢，可直接添加约500μl的FBS。在传代时，可直接补充5ml培养基，分装到两个培养瓶中。一般经过3次此法后可进行一次离心传代，去除死细胞。
2. 离心换液法：如需分瓶，将细胞悬液收集到离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml培养基重悬，按1:2比例分装到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新完全培养基以保持细胞活力。

细胞冻存与复苏

冻存步骤

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%的胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞变圆后用5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使其脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，将细胞沉淀悬浮在1ml的生物无血清冻存液（货号：C7001）中，混匀后装入冻存管中。
4. 将冻存的细胞放入-80℃冰箱，若需转存于液氮罐，需在-80℃冰箱中保存至少24小时后再进行转移。

复苏步骤

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至管内无结晶，随后用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，使用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2的培养箱中培养。
4. 第二天换用新鲜完全培养基继续培养。

注意事项

有些细胞在运输过程中可能易脱落，这属于正常现象。如脱落较多，请将培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清液作过渡培养。沉淀后添加胰酶1-2ml，轻吹重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃去上清后重悬。

细胞质量保证

如您在使用过程中遇到细胞问题，请及时联系我们。常见的问题包括：

• 运输中造成的细胞丢失或培养基漏液，符合条件可重发。
• 48小时内发现细胞污染问题，需提供实验结果核实后重发。
• 收到细胞后的状态不良，需提供清晰照片作为重发依据。

请注意，因客户原因导致的细胞状态不佳，或未提供必要的资料和照片，无法进行重发。有关细胞的更多信息和支持，请访问南宫28官方网站。