南宫28质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061实验准备

南宫28质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061单位的定义：酰胺酶单位指在30℃、pH 9.5的条件下，每分钟产生1μmol对硝基苯胺所需的酶量。其计算公式为：AU/vial=[(a-b)/25] × (1/962) × (40/0.1)，其中a为检测样品中的吸光度，b为空白对照中的吸光度。

南宫28质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061实验操作流程包括以下步骤：

1. 使用聚硅酮处理的微量离心管和吸管端，以防止任何蛋白的污染。
2. 采用质谱分析用凝胶染色试剂盒，如银染剂MS试剂盒（产品编号：299-58901）和负凝胶染色MS试剂盒（产品编号：293-57701）。
3. 电泳分离蛋白质样品。
4. 从凝胶中切割蛋白质片段并放入微量离心管中。
5. 使用质谱分析用凝胶染色试剂盒中的脱色溶液使凝胶脱色。
6. 加入300μL乙醇至试管，搅拌器振荡30分钟。
7. 去除乙醇，用Parafilm膜覆盖微量离心管。
8. 在Parafilm膜上打出针孔，进行真空干燥15分钟。
9. 将100μL 10mmol/L DTT溶解于100mmol/L碳酸氢铵中，在56℃恒温1小时。
10. 室温冷却后，用等量的50mM碘乙酰胺溶解于100mmol/L碳酸氢铵，暗处恒温45分钟并涡旋。
11. 使用100μL 100mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟。
12. 用300μL乙醇干燥凝胶片段15分钟。
13. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵溶胀凝胶片段15分钟。
14. 再用300μL乙醇干燥凝胶片段15分钟。
15. 去除液相，并进行真空干燥凝胶片段15分钟。
16. 加入100μL赖氨酸内切酶溶液，在冰水浴中溶胀凝胶片段45分钟。
17. 去除100μL赖氨酸内切酶溶液，将凝胶片段放入37℃、10μL 50mmol/L Tris-HCl pH 8.5中过夜。
18. 加入50μL 20mmol/L碳酸氢铵，振荡凝胶片段3次进行多肽抽提，持续20分钟。
19. 加入5%甲酸/50%乙醇，继续振荡凝胶片段3次抽提多肽，保持20分钟。
20. 如需，使用SpeedVac浓缩多肽。
21. 通过ZipTip进行多肽的脱盐和纯化。
22. 如需，将多肽浓缩至2μL。
23. 加入基质进行质谱分析。

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