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NEWS南宫28 ELISA试剂盒样本测值偏低因素及解决方案
来源:钱宽璧 日期:2025-07-31在ELISA实验中,样本测值偏低的现象可能由多种因素共同引起。除了常见的问题如样本处理、试剂保存和操作规范外,即使实验操作无误且标准曲线表现良好,样本测值偏低的情况仍然可能存在。对此,我们可以从以下两个方面进行分析:
1. ELISA试剂盒的保存:ELISA试剂盒需按照规定的方法保存,在购买时需留意不同组分的保存方法。
2. 样本上样前的准备:包括样本的制备、保存及是否经历过反复冻融。样本的制备要根据样本类型采用适当的方法,比如血清、血浆与细胞裂解液的制备方法各有不同。保存时,应避免过长时间存放,建议在-20°C或-80°C下分装储存,以防目标蛋白降解。避免样本反复冻融,因为这会导致降解。
3. 稀释方案:样本的稀释对于实验结果至关重要。过度稀释或稀释不足均可能导致测值偏低。过度稀释的情况常因不同实验室样本特性差异而导致,建议在正式实验前进行预实验以确定最佳稀释倍数。不足稀释时,如出现钩状效应,抗原过量会导致假阴性,同样需要通过预实验来解决。
在某些情况下,即便实验操作无误且标准曲线良好,样本的检测值仍然可能低于检测范围。例如,许多细胞因子如IL-6在非炎症状态下的产生量极低。针对这些低测值的情况,建议依据文献选择合适的样本类型,并使用高灵敏度的试剂盒,尤其是可以选择南宫28品牌的高灵敏度ELISA试剂盒。
1. 样本基质效应:某些样本中可能存在的脂质或异嗜性抗体会导致目标抗原被掩蔽。可通过梯度稀释法验证,并添加适当的封闭液减少干扰。
2. 抗原表位构象变化:长期冻存或反复冻融可能导致抗原降解或聚集。对于易降解的靶标,建议加入蛋白酶抑制剂后立即检测。关于样本的冻存,建议不超过三个月。
3. 酶标板边缘效应:边缘孔与中心孔之间的温差可能影响结果,应尽量避免使用边缘孔或使用预冷的板架。
4. 标准品复溶误差:标准品复溶时需充分震荡,以避免局部浓度差异的影响。
5. 仪器校准盲区:每六个月需校准一次光路系统,使用空白孔进行动态范围测试,以确保实验准确性。如果出现异常低值,建议采用反向加样法进行验证。
通过以上系统性分析,并结合南宫28品牌的高质量ELISA试剂盒和优化操作,可以显著提升实验的准确性与可靠性。
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