南宫28的细胞培养指南旨在为生物医学研究人员提供精确、系统的细胞培养流程，确保细胞生长与增殖的最佳效果。以下是细胞培养的具体条件和步骤。

培养条件

气相环境应保持为95%空气与5%二氧化碳，适宜的培养温度为37℃。培养基应为1640培养基，添加2mM L-glutamine，调整至含有15g/L的碳酸钠、45g/L的葡萄糖、10mM HEPES和10mM的丙酮酸钠，同时补充0.05mM的2-巯基乙醇和0.4mg/ml的G418。此外，培养基中还应添加10%胎牛血清（FBS）以促进细胞生长。

传代方法

在细胞达到80% confluency时，建议进行传代。第一次传代可采用1:2的比例进行，后续则按照情况适当调整比例。每2天应更换1次培养基，确保培养环境的稳定。

细胞处理注意事项

收到细胞后，首先请勿立即开瓶，务必核对标签信息是否与订购一致，并检查瓶体是否完好。若无异常，使用显微镜观察细胞状态，并拍照记录（建议使用40x、100x、200x镜头各至少拍摄一张），以备售后参考。前三天的照片是判断细胞状态的重要依据。

细胞传代步骤

在细胞的传代过程中，需遵循以下步骤：> 1) 丢弃培养基，用不含钙镁的PBS缓冲液洗涤细胞1-2次； 2) 添加0.25%胰蛋白酶至培养瓶，置于37℃恒温箱消化1-2分钟； 3) 细胞大部分变为圆形并脱落后，立即加入5ml完全培养基终止消化； 4) 轻轻吹打细胞以确保完全脱落，然后转移悬液至15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟，弃去上清液后补充1-2ml完全培养基重新悬浮。

根据需要将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代，添加5-8ml完全培养基，最后置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

细胞冻存与复苏

如果需要对细胞进行冻存，请在细胞生长至80%覆盖面积时，清洗培养瓶并加入适量的胰蛋白酶消化。消化完成后，与冻存液混合，转入冻存管中并迅速放入-80℃的冰箱，保存24小时后可转入液氮罐中。

复苏细胞时，从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，并用酒精擦拭外壁。将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，轻度离心后弃去上清，再用完全培养基重悬，然后接种至T25培养瓶中培养。

请注意，细胞在运输过程中可能会发生脱落，若发现细胞附着不牢，可以进行适当的处理，确保细胞生长状态良好。

如在操作过程中遇到问题，请依据我们的指南及时处理，我们致力于为您提供最佳服务，欢迎随时联系南宫28。确保产品质量和服务，是我们对客户的承诺。