南宫28提供的人小细胞肺癌细胞DMS114培养指南旨在帮助研究人员有效地进行细胞培养、传代和冻存。以下是细胞培养的详细步骤和注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称：人小细胞肺癌细胞DMS114

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议1:2传代，传代后2天换液。备注：使用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养。若效果不理想，建议使用南宫28的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应迅速培养至良好状态，并灌满完全培养液，封好瓶口以确保细胞存活。使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后将其放入超净台内，保持严格的无菌操作。在37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况，不同倍数拍照保存（建议拍摄40x、100x、200x的照片），前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果未超过80%的汇合度，将培养液收集至离心管中，并保留5ml完全培养基，置于37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超80%，则进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清液，并添加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例将细胞悬液进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落。
3. 将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
4. 弃去上清，加入1ml南宫28无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
5. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，则需在-80℃下存放24小时以上再转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶，然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能因为贴壁不牢而发生脱落，这是正常现象。如果脱离较多，可以将培养瓶内所有培养液收集至离心管，进行离心处理后重悬并消化。

五、售后条款

1) 南宫28细胞出现问题的重发情况：

1. 运输途中细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等情况，可进行重发。
2. 若收到细胞48小时内发生污染，需提供真实实验结果，核实后可重发。
3. 常温发货或干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，大部分细胞未存活，需提供照片核实，方可重发。
4. 如细胞复苏后或未开封情况下出现污染，亦可重发。
5. 若收到的细胞活性有问题，请在7天内提供真实实验结果，核实后重发。

2) 不予重发的情况包括但不限于客户造成的污染、错误操作、未提供培养前照片等。

通过遵循以上步骤与注意事项，您将能够有效地利用南宫28的人小细胞肺癌细胞DMS114进行实验研究，确保细胞的生长和活性。