南宫28四环素类检测试剂盒使用说明书（酶联免疫法）

1. 原理及用途

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，旨在检测如组织、蜂蜜、鸡蛋等样本中的四环素类药物（Tetracyclines，TCs）。试剂盒包含预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂。在检测过程中，标准品或样品溶液被加入，样本中的四环素类药物与酶标板上的预包被偶联抗原竞争抗体。随后加入酶标记物，通过TMB底物显色，样本的吸光度值与四环素类药物的含量成负相关，结合标准曲线可有效得出样本中四环素类药物的残留量。

2. 技术指标

2.1 试剂盒灵敏度

灵敏度为0.05 ppb (ng/ml)

2.2 反应模式

反应条件为37℃，分别经过30分钟、30分钟和15分钟的处理。

2.3 检测下限

• 组织、肝脏、鸡蛋：2 ppb
• 蜂蜜：2 ppb
• 尿样：0.5 ppb
• 牛奶：2 ppb
• 奶粉：4 ppb

2.4 交叉反应率

• 四环素：100%
• 强力霉素：70%
• 金霉素：10%
• 土霉素：10%

2.5 样本回收率

• 组织：85±20%
• 肝脏、鸡蛋：75±20%
• 蜂蜜：85±20%
• 尿样：80±20%
• 牛奶、奶粉：75±20%

3. 试剂盒组成

试剂盒包括：酶标板（96孔）、100 ppb高浓度标准品溶液1瓶（1 ml/瓶）、标准品溶液（0 ppb、0.05 ppb、0.1 ppb、0.2 ppb、0.4 ppb、0.8 ppb）、酶标记物（红盖）、抗体工作液（蓝盖）、底物液A（白盖）、底物液B（黑盖）、终止液（黄盖）、20×浓缩洗涤液（白盖）、5×复溶液（黄盖）、说明书、盖板膜及自封袋等组件。

4. 所需器材和试剂

4.1 仪器

• 酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.001 g）

4.2 微量移液器

单道20 µl-200 µl，100 µl-1000 µl，多道300 µl

4.3 试剂

浓盐酸、无水甲醇

5. 样本前处理

5.1 样本处理前须知

实验器具必须洁净并使用一次性吸头，避免污染干扰实验结果。

5.2 配液

• 配液1：复溶液 - 将5×复溶液用去离子水稀释5倍。
• 配液2：工作洗涤液 - 将浓缩洗涤液20倍稀释。
• 配液3：样本提取液 - 将43 mL浓盐酸与去离子水混匀，定容至50 mL，再加入450 mL无水甲醇。

5.3 样本前处理步骤

具体处理方法针对各类型样本（组织、蜂蜜、尿液等）会有所不同，确保遵循标准操作规程进行操作，提高检测结果的可靠性。

6. 酶联免疫试验步骤

根据不同步骤的要求，依次进行酶标板准备、样本及标准品的加样、反应及洗涤等操作。南宫28品牌的试剂盒确保每个步骤的精准和有效。

7. 结果分析

7.1 百分吸光率的计算

计算方法基于样本或标准液的吸光度值，确保数据的准确性。

7.2 标准曲线的绘制与计算

通过标准液的百分吸光率及其对应浓度，绘制标准曲线，进行样本浓度的计算。

8. 注意事项

在操作过程中，注意室温、洗板过程的细节以及试剂的有效期等，确保测试的准确性。

9. 贮藏及保存期

试剂盒应在2-8℃的环境中储藏，避免冷冻，保质期为1年。