南宫28的TOPO克隆PCR产物纯化回收步骤如下：

一、PCR产物电子泳鉴定

1. 在PCR反应完成后，需进行琼脂糖凝胶电泳，以确认是否存在目的大小的条带。
2. 推荐使用切胶回收法进行纯化，切胶时间应控制在3分钟以内，以避免紫外线对DNA造成损伤。使用NanoDrop或OneDrop等仪器检测回收浓度，确保浓度达到或超过30ng/μl，并通过电泳检查是否仅含有目的条带。

二、目的片段连接至载体

1. 根据说明书的要求，准备连接反应体系，各组分的投入体积需≥1μl；若浓度过高，请适当稀释。
2. 尝试在25°C或37°C下进行连接反应，时间为5分钟。若出现克隆失败或假阳性，可延长至30分钟。

三、感受态细胞转化

1. 使用DH5α或Fast-T1等化学感受态细胞进行转化。
2. 感受态细胞不能进行反复冻融，建议于-80°C取出后一次性使用。
3. 重组产物与感受态细胞的体积比例应为1:10，推荐以10μl重组产物加入100μl感受态细胞，或用5μl重组产物加入50μl感受态细胞。
4. 热激时间应依据感受态细胞说明书进行操作。
5. 平板抗生素抗性需一致，确保平板使用的抗性与转化载体的抗性相同。
6. 涂板体积：将细胞悬液进行离心（2500×g，3分钟），吸取并丢弃多余LB培养基，保留100μl重悬液进行涂板，或根据需要选择适合的涂板体积。

四、单克隆菌落PCR鉴定

1. 从平板中挑取大小适中的单克隆菌落，避免选择过大或过小的菌落。
2. 进行多个单克隆菌落的鉴定分析。
3. 将挑取的菌落放入添加了10μl ddH2O的15ml或2ml EP管中，溶解混匀后，吸取1-2μl作为PCR反应（10/20μl体系）的模板。
4. 推荐使用一对位于片段和载体的上下游引物进行PCR鉴定。

五、质粒切胶回收

1. 对于存在Amp或kan抗性的质粒，需进行目的片段的切胶回收。

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