走进南宫28
NEWS南宫28 RNA提取的Trizol法原理与步骤
来源:汤宗璐 日期:2025-02-14南宫28公司的Trizol试剂主要成分为苯/酚,主要用于细胞裂解,释放细胞内的蛋白质及核酸。虽然苯/酚能有效引起蛋白质变性,但无法完全抑制RNA酶的活性,因此在Trizol中添加了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍和β-巯基乙醇,以抑制内源和外源RNA酶(RNase)的作用。南宫28的Trizol试剂适合直接从细胞或组织中提取总RNA,并能在样品的裂解液或匀浆中保持RNA的完整性。通过向样品中加入氯仿(CHCl3)并离心,样品可分为水相和有机相,而RNA则存在于水相中。收集水相后,可以通过异丙醇沉淀回收RNA。去除水相后,样品中的核酸和蛋白质也可以通过沉淀的方式逐步回收。中间层的DNA可通过乙醇沉淀析出,而有机层中的蛋白则可通过增加异丙醇进行析出。
南宫28的Trizol试剂适用于不同规模的样品提取,无论是小量样品(组织:50-100mg;细胞:5×106)还是大量样品(组织≥1g或细胞≥107),都能迅速提取动物、植物、细菌和血液样本,同时处理多种样品。提取过程中,获得的总RNA无DNA和蛋白质污染,适用于Northern blot、RT-PCR、RNase保护分析等多种应用。
1. 提取组织RNA时,每50~100mg组织需添加1ml Trizol试剂进行裂解;提取细胞RNA时,首先离心沉淀细胞,每5-10×106个细胞添加1ml Trizol,并通过枪筒反复吹打或剧烈振荡以裂解细胞。
2. 将组织或细胞的Trizol裂解液转移至EP管,置于室温(15~30℃)下静置5分钟。接着,按照每1ml Trizol添加0.2ml氯仿的比例,盖紧EP管,手动震荡15秒,静置2-3分钟后,以12000g(2℃~8℃)离心15分钟。
3. 取上层水相置于新EP管中,按每1ml Trizol添加0.5ml异丙醇的比例,放室温(15℃~30℃)下静置10分钟,再进行12000g(2℃~8℃)离心10分钟。
4. 按照每1ml Trizol加1ml 75%乙醇进行洗涤,轻轻混合,并以7500g(2℃~8℃)离心5分钟,弃去上清。让沉淀的RNA在室温下自然干燥,并用RNase-free水溶解RNA沉淀。
注意:在采集生物材料后,尽快进行RNA制备。如果需要暂时保存,建议迅速用液氮冷冻生物材料,并储存于-80℃冷冻柜。在RNA制备过程中,应立即取出冷冻材料,并使用液氮研磨,避免先行解冻,以防止RNase的活性影响。
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